基因型 MiniF lysY (CamR)/fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10--TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10--TetS) endA1 ∆(mcrC-mrr)114::IS10 产品说明 T7 Express lysY电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。T7 Express lysY是BL21菌株的衍生菌株，广泛用于蛋白的原核表达实验。T7 Express lysY是 Lon 和 OmpT 蛋白酶缺陷型菌株，可促进表达蛋白的稳定。fhuA2突变赋予T7 Express lysY菌株对噬菌体T1的抗性。T7 Express lysY菌株含有 lysY质粒（ lysY质粒具有氯霉素抗性），lysY质粒含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。染色体整合了T7噬菌体RNA聚合酶，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。T7 Express lysY电击感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>3×1010 cfu/μg DNA，可用于高质量文库构建。 操作方法 1. 取适量SOC放37度预热1-2小时（每管感受态准备10ml SOC）。 2. 0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟沥干水分，正置5分钟，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电击杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。 3. 取-80℃保存的T7 Express lysY电击感受态细胞插入冰中5 分钟，待其融化，加入目的DNA (质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。 A. 测定转化效率使用1 μl 10 pg/μl的对照质粒 pUC19； B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA后加入适量ddH2O或TE缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬，DNA浓度不超过100 ng/μl，体积不超过5 μl/50 μl感受态。 4. 用200 μl枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中（避免产生气泡），轻轻晃动使液面保持水平状态，盖上杯盖，插入冰中。 5. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV，将电击杯从冰中拿出，用吸水纸擦拭表面，吸干表面水渍，放入电转槽中，电击完成后拿出电转杯放室温，打开杯盖，5秒内加入0.9ml预热的SOC，用1ml 枪吹吸电击杯底部2-3次，混匀后转移到50 ml离心管（BD Falcon 50 ml离心管等），向离心管中补加S.O.C. 培养基至10 ml。37℃，225 rpm复苏60分钟。 6. 5000 rpm离心一分钟收菌，加入适量SOC重悬后涂布到含相应抗生素的S.O.C平板上（因菌量较大，若全部涂板请选用直径15cm培养皿2-5个）。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养13-17小时。 S.O.C 培养基配方 2% Tryptone 0.5% Yeast Extract 10 mM NaCl 2.5 mM KCl 10 mM MgCl2 10 mM MgSO4 20 mM glucose PH-7.0 S.O.C. Medium is suitable for use in the final step of cell transformation to obtain maximal transformation efficiency of E. coli (Hanahan, 1983). 注意事项 1. 加入DNA时体积不应大于感受态体积的1/10。 2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。 3. 当DNA不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。 4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。 5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。 6. 对于连接产物转化，最好转化前乙醇沉淀DNA后用适量ddH2O或TE缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产物，保证DNA浓度不超过100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。 7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。 8. 电击感受态细胞最好保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率下降。