基因型 MATα, ura3, his3, trp1, LexAop (x6)-LEU2 产品说明 EGY48菌株是Clontech公司开发的LexA系统酵母双杂实验用菌株，MATα型，可直接转化质粒进行蛋白互作验证或筛库试验；Transformation marker为：his3，trp1，ura3，报告基因为：LEU2；报告基因UAS (上游激活序列)来源于LexA op(x6)，只有当 Bait和 Prey互作时才能启动 LEU2表达。EGY48-LexA酵母双杂系统系统需要三种质粒配套使用：pLexA、pB42AD、p8op-LacZ。质粒pLexA的筛选标志为HIS3，用于表达DNA-BD(来自原核的202个氨基酸残基组成的LexA蛋白)与目标蛋白 (Bait)的融合蛋白；质粒pB42AD的筛选标志为TRP1，用于表达AD(来自疱疹病毒的88个氨基酸残基组成的B42AD蛋白)与目标蛋白 (Prey)的融合蛋白；报告质粒p8op-LacZ的筛选标志为URA3，报告基因为LacZ，报告基因UAS来源于LexA op(x6)，只有当 Bait和 Prey互作时才能启动 LacZ表达。EGY48感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pGBKT7质粒（7303bp，KanR）检测转化效率>104 cfu/μg DNA。 操作方法 1. Carrier DNA 的预处理：将Carrier DNA 插入95℃金属浴5 min或插入浮漂中95℃水浴3 min，加热后快速插入冰中。 2. 取100 µl冰上融化的EGY48感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，预处理后的Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀，30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。 3. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。 4. 5000 rpm离心 40 s弃上清，ddH2O 400 µl 重悬，离心 30s弃上清。 5. ddH2O 50 µl重悬，涂板，29℃培养48-96 h。