基因型 MATa AGA1::GAL1-AGA1::URA3 ura3-52 trp1 leu2-delta200 his3-delta200 pep4::HIS3 prbd1.6R can1 GAL 产品说明 EBY100菌株是 Invitrogen公司开发的酵母展示用菌株，MATa型，与pYD1质粒配套使用，可直接转化质粒进行蛋白展示试验；Transformation marker为：leu2，trp1。EBY100-pYD1酵母展示系统通过酿酒酵母的a凝集素受体（a- agglutinin receptor）将目标蛋白展示在细胞表面，方便后期筛选。其基本原理为：a凝集素受体由AGA1和AGA2 两个亚基组成，AGA1蛋白(725个氨基酸)由EBY100细胞合成，分泌到细胞外，在细胞外基质中与酵母细胞壁的β-葡聚糖共价结合，AGA2蛋白( 69个氨基酸)可以通过两个二硫键结合到AGA1蛋白上；将目标蛋白构建到pYD1质粒上，与AGA2蛋白融合表达，AGA2蛋白在N端，目标蛋白在C端，当含有pYD1质粒的EBY100酵母菌在含有半乳糖，同时不含葡萄糖的培养基中诱导表达时可以表达出AGA2-target protein融合蛋白，该融合蛋白通过AGA2结合到EBY100酵母细胞表面的AGA1蛋白上进而将目标蛋白展示在酵母表面。EBY100感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pGBKT7质粒（7303bp，KanR）检测转化效率>104 cfu/μg DNA。 操作方法 1. Carrier DNA 的预处理：将Carrier DNA 插入95℃金属浴5 min或插入浮漂中95℃水浴3 min，加热后快速插入冰中。 2. 取100 µl冰上融化的EBY100感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，预处理后的Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀，30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。 3. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。 4. 5000 rpm离心 40 s弃上清，ddH2O 400 µl 重悬，离心 30s弃上清。 5. ddH2O 50 µl重悬，涂板，29℃培养48-96 h。