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产品说明
PEG是一种高分子聚合物,在酵母感受态转化过程中只有分子量达到3000左右的PEG才会发挥最大的转化促进作用。PEG在酵母转化中起到在高浓度LiAc环境中保护细胞膜,减少LiAc对细胞膜结构损伤的作用;同时PEG可促使质粒更紧密贴附酵母细胞壁。LiAc可使酵母细胞产生一种短暂的感受性状态,此时酵母能够摄取外源DNA。PEG/LiAc是唯地生物生产的酵母感受态细胞转化所必需的配套试剂,每个转化反应需要500 µl PEG/LiAc。
使用方法
1. Carrier DNA 的预处理:将Carrier DNA 插入95℃金属浴5 min或插入浮漂中95℃水浴3 min,快速插入冰中。
2. 取100 µl冰上融化的酵母感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5 µg,预处理后的Carrier DNA 10 µl,PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀,30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
3. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。
4. 5000 rpm离心 40 s弃上清,ddH2O 400 µl 重悬,离心 30s弃上清。
5. ddH2O或0.9% NaCl 50 µl重悬,涂平板。
注意事项
1. PEG长时间静置易沉淀,在每次使用前务必摇晃,使试剂中各组分分布均匀。
2. 不开封的PEG/LiAC Solution可在4℃长时间保存,开封之后最好放-20℃保存,发现污染立即丢弃。