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产品说明
Carrier DNA (鲑鱼精DNA) 为短的线形单链DNA,可包裹质粒DNA,在酵母细胞摄取外源质粒DNA过程中发挥作用,促进质粒进入酵母细胞,另外还可保护质粒免于被DNA酶降解。在每次使用前务必进行热变性,保证Carrier DNA在转化实验体系中以单链形式存在。Carrier DNA是唯地生物生产的酵母感受态细胞转化所必需的配套试剂,每个转化反应需要10 µl Carrier DNA。
使用方法
1. Carrier DNA 的预处理:将Carrier DNA 插入95℃金属浴5 min或插入浮漂中95℃水浴3 min,快速插入冰中。
2. 取100 µl冰上融化的酵母感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5 µg,预处理后的Carrier DNA 10 µl,PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀,30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
3. 将离心管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。
4. 5000 rpm离心 40 s弃上清,ddH2O 400 µl 重悬,离心 30s弃上清。
5. ddH2O或0.9% NaCl 50 µl重悬,涂平板。
注意事项
1. 在每次使用Carrier DNA前最好进行加热变性,保证Carrier DNA在转化实验体系中以单链形式存在,只有单链的DNA才有最大的保护质粒DNA,促进转化的功能。加热变性后在-20℃保存的Carrier DNA也可以使用,但是操作时要快速插入冰中,最好在冰中融化,不可让Carrier DNA在室温融化。
2. Carrier DNA 可在4℃短时间保存,如需长时间保存请放-20℃,发现污染立即丢弃。