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生物试剂
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碧云天的Iodoacetyl Agarose (碘乙酰琼脂糖凝胶)，也称Iodoacetyl琼脂糖凝胶、巯基蛋白琼脂糖凝胶、Iodoacetyl Resin，由高质量的碘乙酸衍生物与高度交联的6%琼脂糖共价偶联而成，可快速、高效、特异性地与含巯基的抗原结合，从而实现抗原的固定化，进而利用抗原抗体的特异性反应对免疫血清中的抗体进行高效纯化，是常用的抗体高效纯化介质。碘乙酰琼脂糖凝胶也可以与含巯基的多肽、蛋白或其它生物样品结合，从而用于去除样品中含巯基的生物杂质。
卤代乙酰基(Haloacetyls)与巯基化合物在生理至碱性条件下(pH7.2-9)会发生亲核取代反应，形成稳定的硫醚键，该反应主要分为两步：第一步为亲核取代，即巯基中的硫原子作为亲核试剂，攻击卤代物中的卤素原子形成一个中间体；第二步为消除反应，中间体经过一系列的质子转移和电子重排形成最终的产物。本产品主要基于碘乙酰在生理环境下容易与谷胱甘肽和半胱氨酸发生反应，形成相应的硫醚和卤化氢[1]，从而进一步用于亲和纯化。本产品在抗体纯化领域内应用非常广泛，可以特异性地结合并固定含巯基的抗原、多肽或蛋白等生物配体，用于抗体的纯化或含巯基的多肽或蛋白的去除等。本产品的实验流程参考图1。
图1.碧云天Iodoacetyl Agarose (碘乙酰琼脂糖凝胶) (P2169)的实验流程图。
本产品结合量容量高。与同类的很多产品相比，本产品具有非常高的结合容量，对复杂样品中含巯基的抗原、多肽或蛋白等生物配体可以快速进行结合和固定。本产品中Iodoacetyl Agarose为50%的凝胶悬浊液，每毫升Iodoacetyl Agarose沉淀可结合不少于1mg含巯基的七肽，也可结合不少于3mg IgG。本产品固定Protein A后用于纯化兔IgG的效果参考图2。
图2.碧云天Iodoacetyl Agarose (碘乙酰琼脂糖凝胶) (P2169)结合Protein A后用于纯化兔IgG的效果图。泳道1为Input，即为用于纯化的兔IgG；泳道2和4为本产品结合Protein A后纯化的兔IgG、再分别经SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1X) (P0015A)洗脱或酸性洗脱后得到的样品；泳道3和5为B公司同类产品(Competitor)结合Protein A后纯化兔IgG、再经SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1X) (P0015A)洗脱或酸性洗脱后得到的样品。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
本产品特异性强。本产品可特异性地结合含巯基的多肽或蛋白等生物配体以作为抗原，进而利用抗原抗体的特异性对免疫血清中的抗体进行高效纯化，获得的产物纯度高，可进一步用于Western、ELISA、质谱分析等一系列后续的分析测试。
本产品的主要指标如下表：
| Characteristics | Description |
| Product content | 50% settled gel in specific protective buffer |
| Agarose structure | 6% cross-linked agarose |
| Average particle size | 45-165μm |
| Ligand | The derivative of Iodoacetic acid |
| Binding capacity | Per ml settled gel: ≥1mg sulfhydryl-containing peptides of 7 amino-acids, ≥3mg IgG |
| Specificity | Free sulfhydryls ligands |
| pH Stability | pH5-10 |
| Elution method | Elution with acid or SDS-PAGE loading buffer for single-use applications |
| Application | Antibody purification |
本产品为50%凝胶悬液，包装体积为总体积，每毫升本产品中共含有0.5ml凝胶沉淀物。如果每个样品使用50μl琼脂糖凝胶悬液，每毫升本产品可以用于20个样品反应。
保存条件：-20ºC避光保存，一年有效。4ºC避光保存，至少一个月有效。
注意事项：本产品使用前要适当充分重悬，即颠倒若干次使琼脂糖凝胶混合均匀，混匀操作须轻柔，不宜剧烈涡旋震荡等，避免蛋白变性、琼脂糖凝胶破碎等。
本产品含有微量的防腐剂，使用前宜先用TBS等适当溶液洗涤凝胶3次，以充分消除防腐剂可能产生的干扰。
在纯化时，建议设置阳性和阴性对照组。
蛋白样品收集后宜尽快完成纯化工作，并应始终放置在4ºC或冰浴，以减缓蛋白降解或变性。为有效抑制蛋白降解，可以在蛋白样品中添加适量的蛋白酶抑制剂混合物，例如碧云天的P1005/P1006蛋白酶抑制剂混合物(通用型, 100X)、P1048/P1049蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型, 质谱兼容, 50X)、P1010/P1011蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 100X)、P1050/P1051蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 50X)等。
如果离心不能完全除去蛋白样品中的不溶物，可以将样品溶液用0.45μm的滤膜过滤。酸性溶液洗脱或使用SDS-PAGE洗脱后的琼脂糖不可重复使用。为了尽量减少碘乙酰基的脱落，无论是手动操作还是自动操作，低pH洗脱步骤都不要超过10分钟。
高浓度的DTT、巯基乙醇、盐酸胍等对本产品与配体的结合可能有一定影响，但Western及IP细胞裂解液(P0013)、RIPA裂解液(P0013B/C/D)或NP-40裂解液(P0013F)等都完全兼容本产品。碧云天生产的不同裂解液的主要特点和差异，以及如何选择裂解液可参考我们的相关网页：http://www.beyotime.com/support/lysis-buffer.htm。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
