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Gibson 组装法由 J. Craig Venter 研究所的 Daniel Gibson 博士及其同事发明，由 Synthetic Genomics 公司授权予 NEB 许可。不管片段的长短和末端匹配性如何，该方法都可以成功组装多个 DNA 片段。对于较大的 DNA 构建体而言，该方法易用、灵活、适用性强，因此已被合成生物学领域广泛采用。
Gibson 组装可在等温条件下，单管反应实现多个带重叠末端的 DNA 片段的组装（1,2）。Gibson 组装预混液在同一反应缓冲液中有三种不同的酶活性：
- 核酸外切酶活性会产生单链 3´ 突出末端，促使互补的末端重复序列（重叠区）退火。
- 聚合酶活性会填补退火片段的缺口。
- DNA 连接酶活性能在组装后的 DNA 切刻处进行连接。