T4 DNA 连接酶由携带 T4 噬菌体 gene 30 的大肠杆菌产生。该酶催化双螺旋DNA或RNA之间的 5'-磷酸基团和 3'-羟基之间形成磷酸二酯键。该酶在双链 DNA、RNA 或者DNA/RNA复合物间可修复单链缺刻, 并且可以连接有粘性末端或者平末端的 DNA 片段，但对于单链核酸无活性，主要用于限制性内切酶酶切产物 DNA 片段克隆、基因定点突变与PCR 产物克隆、线性 DNA 自环化与修复双链 DNA 缺刻。T4 DNA Ligase 需要 ATP 作为辅助因子，在室温下完成粘性末端连接反应仅需 10 分钟。 产品组分： 组分名称 规格 T4 DNA Ligase (5U/μL) 200 μL 10×T4 DNA Ligase Buffer 2×1 mL 50% PEG 1mL 注：1 U=1 Weiss unit 使用方法： 1. DNA 插入片段连接至载体 DNA（粘性末端连接） (1) 于冰上配制如下反应体系： 试剂 用量线性化载体 DNA 20~100 ng 插入片段 DNA 3:1~10:1 ( 片段：载体摩尔比) 10×T4 DNA Ligase Buffer 2 μL T4 DNA Ligase 1 U (0.2 μL) Nuclease-Free Water To 20 μL (2) 充分混匀并瞬离，22℃温育 10 min； (3) 取 1~5 μL 的连接产物用于 50 μL 化学感受态细胞的转化，或者取1~2 μL 用于50μL电转感受态细胞的转化。 注：如果连接反应产物用于电转化，应使用离心柱或者氯仿抽提清洁DNA 代替热失活步骤。2. DNA 插入片段连接至载体 DNA（平末端连接） (1) 于冰上配制如下反应体系： 试剂 用量线性化载体 DNA 20~100 ng 插入片段 DNA 3:1~10:1 ( 片段：载体摩尔比) 10×T4 DNA Ligase Buffer 2 μL 50% PEG 2 μL T4 DNA Ligase 5 U (1 μL) Nuclease-Free Water To 20 μL (2) 充分混匀并瞬离，22℃温育 1 h； (3) 取 1~5 μL 的连接产物用于 50 μL 化学感受态细胞的转化，或者取1~2 μL 用于50μL电转感受态细胞的转化。