产品简介

胰蛋白酶（Trypsin）是一种丝氨酸水解酶，它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断，水解细胞间的蛋白质，破坏细胞间的连接，从而使组织或贴壁细胞离散成单个细胞。胰酶分散细胞的程度与组织或细胞的特性、胰酶浓度、温度和作用时间有关，因此使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。

一般常用胰酶的工作浓度为0.25%，而半贴壁细胞或对胰酶敏感的细胞常采用低浓度（0.05%）的胰酶进行细胞消化。由于EDTA能够螯合Ca²⁺和Mg²⁺，从而破坏细胞连接、促进细胞的解离，因此在胰酶溶液中常常会加入一定量的EDTA混合使用，以增强解离效果。

本产品将传统形式的胰酶溶液一分为二，分为A瓶和B瓶，其中：

A瓶：装有125mg胰蛋白酶粉末，为白色细密粉末；

B瓶：装有0.2g/L EDTA-2Na，溶于D-Hanks' 液，不含酚红。

使用前，在无菌条件下，将B瓶溶液转入A瓶，轻摇混匀，即得到0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，即可使用。

储存条件

未开封，2-8℃保存，有效期1年。混合后，2-8℃保存，并在1个月内使用完。混合后若想长期保存，可分装后-20℃保存，2年有效。

使用方法

1、在无菌条件下，将B瓶溶液转入A瓶，轻摇混匀，即得到0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液。

2. 贴壁细胞的消化：

① 吸去培养液，用无菌的PBS、Hanks' 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。

② 加入少量胰蛋白酶-EDTA溶液，盖过细胞即可，室温放置 1~2 min。不同的细胞消化时间有所不同，对于贴壁牢固的细胞可适当延长消化时间。

③ 显微镜下观察，细胞明显收缩变圆，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化；或者用移液枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除消化液。加入含血清的细胞培养液，吹打分散细胞，即可直接用于后续实验。

④ 如果发现消化不足，可加入胰蛋白酶-EDTA溶液重新消化。

⑤ 如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，先加入含血清的培养基终止消化，再把细胞全部吹打下来。500~800g 离心1 min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。

3. 组织的消化：

不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。 

注意事项

1. 由于不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样，因此操作人员应根据实际情况，确定最佳消化时间；消化细胞时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁和生长状况。

2. 使用本产品时应注意无菌操作，避免污染。

3. 由于D-Hanks' 平衡盐溶液NaHCO₃含量较低（0.35g/L），因此该型胰蛋白酶溶液不能用于5% CO₂的环境，若放入CO₂培养箱，溶液将迅速变酸，使用时应注意。

4. 本产品仅用于科学研究，不用于诊断和治疗。