产品说明

人鼻病毒 3C 蛋白酶(HRV 3C 蛋白酶)是识别 Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln↓-Gly-Pro 位点的半胱氨酸蛋白酶。本产品具有His & GST双标签，易于通过 Ni-NTA 及 GST beads 去除。在合适的反应条件下，目标蛋白质可被蛋白酶完全酶切，切割效率可能因切割位点周围的序列、构象和靶蛋白的溶解度而变化，可以通过提高温度(37°C )、增加酶的使用量或延长切割时间来提高切割效率。

产品规格

货号： KTSM2003

规格：1 kU/支

储存条件：-20℃ 可保存6个月；-80℃ 可保存 1 年

保存建议：为最大限度的避免损失，我们建议使用前小量分装以避免反复冻融。

酶活性定义：在1×HRV 3C Buffer（20 mM Tris-HCl，pH8.0，150 mM NaCl，0.5 mM EDTA & 1 mM DTT）中，4℃ 下反应16 h，剪切 >95% 的100 μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位

比活力（specific activity）：>10 U/μL

储存缓冲液：20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，pH8.0，0.5 mM EDTA，1 mM DTT，50% Glycerol

酶切缓冲液：20 mM Tris，pH8.0，150 mM NaCl，0.5 mM EDTA，1 mM DTT 或 10 mM HEPES，pH7.0，150 mM NaCl，0.5 mM EDTA，1 mM DTT或10 mM PBS，pH7.4，0.5 mM EDTA，1 mM DTT或根据实验需求配制所需缓冲液小试

分子量：47 kDa

标签：His & GST (N端)

纯度：＞95%（by SDS-PAGE）

操作步骤

1.在 1X HRV 3C Buffer (25 mM Tris-HCl，pH7.0，150 mM NaCl，0.5 mM EDTA and 1 mM DTT) 中，加入100 μg 融合蛋白和0-1U的 HRV 3C Protease。

2.在 4°C 恒温反应 16 小时后， 取 30 μL 上述反应液，置于单独的 EP 管中。
3.向上述 EP 管中各加入 10 μL 4X SDS Loading Buffer， 样品煮沸 5 min ，取 10 μL 进行 SDS-PAGE 分析。
注：有些蛋白需要在低温环境下酶切，可以通过延长酶切时间或者增加3C酶的用量来达到完全消化融合蛋白的目的。

HRV 3C酶与含3C酶切位点的融合蛋白反应后SDS-PAGE胶图

含HRV 3C酶切位点的融合蛋白分子量为71 KDa，底物的用量为 100 μg ，酶的用量依次为 0 U、0.10 U、0.30 U、0.40 U、0.60 U、0.70 U、0.90 U、1.0 U，4℃ 反应16小时后的酶切产物为26 kDa的 GFP 标签和45 kDa的目的蛋白。

声明：本产品仅供科学研究使用，不能用于人、动物的医疗或诊断程序等。