Proteinase K 激酶可用于断裂 MTX 与 BSA 之间的酰胺键以及 BSA 结构中的酰胺键[2]。
指南(以下是我们推荐的协议。该协议仅提供指南,应根据您的具体需求进行修改)。
Proteinase K 具有优越的蛋白质降解特性,可用于直接从接种的病毒运输培养基 (VTM) 中检测 SARS-COV2 病毒成分,无需提取 RNA[3]。
SARS-CoV2 rRTPCR 检测方案[3]:
1.将每份 SARS-COV2 样本的 VTM 分离到三个 EP 管中 (每管 45 μL);
2.加入 2.5 μL (20 mg/mL 浓缩液) Proteinase K (PK),使 PK 的终浓度为 ~1 mg/ml VTM;
3.25°C 孵育 5 分钟;
4.60°C 孵育 15 分钟;
5.98°C 孵育 10 分钟,4°C 保存样品;
6.取 5 μL 提取的 RNA 作为模板,进行 rRTPCR 检测;
7.用 BIORAD CFX96 实时荧光定量 PCR 仪进行 rRTPCR 检测,以阈值循环数 (Ct) 值小于 40 为阳性标准。
Proteinase K 可提高痰液样本的均质效果和阳性率,提高提取的核酸浓度[4]。
甲型流感病毒 (IAV) 核酸提取方案[4]:
1.将标本分装至三个 EP 管中 (每管 500 μL);
2.加入 500 μL 0.4 mg/mL Proteinase K 缓冲液,涡旋 20 秒;
3.55°C孵育 25 分钟,每 5 分钟涡旋 5 秒;
4.采用全自动核酸提取系统 (上海之江生物技术有限公司) 通过磁珠法提取 RNA,取 200 μL 样本;
5.评估纯 RNA 产品的 A260/A280 比率,标准范围为 1.8 至 2.0。
MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.