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碧云天的BeyoDesalt™ G-25脱盐柱(Fine, 70ml)，即BeyoDesalt™ G-25 Desalting Column (Fine, 70ml)，是一种简单、快速、高效地使用Beyodex™ G-25 Fine (G-25 F)基质分离大分子量物质与小分子量物质的预包装即用型层析柱，俗称脱盐柱，主要用于去除蛋白质、核酸、多肽、多糖等样品中的盐离子、去垢剂、小分子染料、缓冲剂等杂质。本脱盐柱使用的填料为Beyodex™ G-25 Fine，填料粒径为40-140μm，可分离分子量>5kDa的蛋白质或其它大分子样品，柱床体积为70ml，建议上样量为2-20ml，本产品的功能和使用方法与Cytiva的HiPrep 26/10 Desalting基本一致，可与层析系统(如AKTA™层析系统)连接使用。
本产品采用的是Beyodex™ G-25 Fine基质，该基质是葡聚糖(Dextran)经环氧氯丙烷交联剂通过醚键交联形成的三维网状筛孔结构的高分子聚合物，与Sephadex G-25 Fine的性能基本一致。本产品用于分离样品时，体积较大的大分子不能进入基质网状筛孔而被阻隔在基质凝胶之外，随着流动溶液沿着基质凝胶颗粒间的缝隙移动，下移速度较快，先被洗脱出柱；体积较小的分子或离子可以进入基质网状筛孔从而进入凝胶内部，随着流动溶液在凝胶颗粒的网孔内移动，因此小分子量物质在基质内停留时间更长，下移速度较慢，后被洗脱出柱，这种分离纯化方式被称为尺寸排阻层析(Size-exclusion chromatography, SEC)，也常被叫做分子筛层析(Molecular sieve chromatography, MSC)或凝胶过滤层析(Gel filtration chromatography, GFC) [1-2] (图1)。
图1. 碧云天BeyoDesalt™脱盐柱的工作原理图。
本产品的基本信息如下表:
| 基质(Matrix) | Beyodex™ G-25 Fine, cross-linked dextran |
| 填料粒径(Bead size) | 40-140μm |
| 分离范围(Exclusion limit) | Mw>5kDa (Mw: molecular weight, also mentioned as Mr: relative molecular mass) |
| 建议上样量(Recommended sample volume) | 2-20ml |
| 样品稀释倍数(Sample dilution) | 1.5-5 |
| 柱床体积(Column volume, CV) | 70ml |
| 柱床尺寸(Column dimensions) | 2.68×12.5cm |
| 柱床内径(Column i.d.) | 26.8mm |
| 压力最大值(Column hardware pressure limit) | 5bar (0.5MPa) |
| 建议流速(Recommended flow rate) | 5-20ml/min |
| 最大流速(Maximum flow rate) | 20ml/min |
| 流速10ml/min时背压(Back pressure at 10ml/min) | 1.5bar (0.15MPa) |
| 化学稳定性(Chemical stability) | All commonly used buffers; Avoid oxidizing agents |
| pH稳定性(pH stability) | pH2-13 |
| 使用方法(Operation) | Syringe; peristaltic pump or chromatography system |
| 保存条件(Storage) | 20% ethanol at 4-30ºC |
本脱盐柱应用广泛，可以有效去除样品中的盐离子、去垢剂、小分子染料、缓冲剂等杂质。可用于对蛋白质、核酸、多肽、多糖等样品进行脱盐，完成溶液置换；去除培养基中的酚红，便于后续通过离子交换层析纯化蛋白质或核酸；去除DNA样本中的单核苷酸，便于后续DNA测序；去除样本中的小分子量标记物；通过分离大分子量物质与小分子量物质终止两者之间的反应；移除蛋白酶的产物、辅助因子或抑制剂；去除核酸标记反应中多余的放射性标记物；去除体外生物素标记反应中多余的生物素(D-Biotin)。采用AKTA™层析系统分离2.5-20ml样品的效果图参见图2。
图2. 碧云天的BeyoDesalt™ G-25脱盐柱(Fine, 70ml) (P2623)分离大分子量物质与小分子量物质的效果图。采用AKTA™层析系统，系统流速5ml/min，平衡、洗脱溶液均为10mM Tris pH7.4, 50mM NaCl，通过上样环(Loop)分别注入2.5、5、10、15和20ml样品(2mg/ml BSA in 10mM Tris pH7.4, 500mM NaCl)。实线A280nm代表紫外吸收值实时监测大分子量物质(BSA)，箭头表示BSA在1.5-4.0ml处被洗脱下来；虚线代表电导读数实时监测小分子量物质(NaCl)。实验结果显示BeyoDesalt™ G-25脱盐柱可以有效分离大分子量物质与小分子量物质。实际效果会因样品种类、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
本脱盐柱显著优于传统半透膜透析方法。①分离速度快、节省时间：脱盐柱可以5-20ml/min的高流速对样品进行快速分离，处理一个样品通常只需要5分钟，而半透膜透析至少需要6小时；②适合小体积操作、样品回收率高：脱盐柱可以有效处理2-20ml的小体积样品，回收率通常>95%，但是半透膜透析后释放样品时会有部分样品粘附在半透膜上，无法完全回收，因此不适合小体积样品；③节省溶液：半透膜透析时需要大量的缓冲液，但是脱盐柱仅需250ml缓冲液即可完成实验。
本脱盐柱具有标准1/16英寸接口，使用方便。本脱盐柱为1/16"倒锥形接口，不需要任何转接头即可适配商品化的各类中压液相纯化系统，如AKTA™层析系统等；也可使用鲁尔接口注射器(FS401-FS411)或蠕动泵，通过合适的1/16" Male/Luer Female转接头(FC005)与脱盐柱进行连接。如果没有相应的转接头不推荐连接注射器或蠕动泵使用，因为容易出现脱盐柱内部压力过高而导致进样困难甚至漏液的情况。
本脱盐柱可根据实验需求通过串联2-5根脱盐柱增加上样体积。1根脱盐柱最大可以处理20ml样品，2根本脱盐柱串联最大可以处理40ml样品，以此类推，5根本脱盐柱串联最大可以处理100ml样品。
保存条件：
4ºC保存，两年有效。室温保存，至少一个月有效。
注意事项：脱盐柱反复使用，可能会导致样品回收率降低。
请勿冷冻保存本产品，冻结会导致脱盐柱的基质碎裂。
保存和纯化过程中应始终保持基质湿润，避免气泡进入脱盐柱中。
由于脱盐后，样品会被稀释，所以拟脱盐的目标蛋白浓度尽量不要太低，以免脱盐后目标蛋白浓度太低不得不进行浓缩。
建议在缓冲液中加入25mM NaCl，以防止潜在的离子间相互作用。如不能使用NaCl，可以尝试加入100mM乙酸铵(NH4Ac)或100mM碳酸氢铵(NH4HCO3)挥发性缓冲液。
当缓冲液中盐浓度>1M时，疏水性物质在柱子内的停留时间可能会延长或与基质结合。
当缓冲液中含有>1.5M (NH4)2SO4时，脱盐柱基质可能会发生收缩。
在冷库、层析冷柜等低温条件下使用20%乙醇或其它粘稠的缓冲液时，注意保持脱盐柱的压力<0.5MPa，如果柱压过高可以通过降低流速降低柱压。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
