碧云天生产的BeyoNGS™ DNA Library Quick-Prep Kit (For Illumina)，中文名为BeyoNGS™ DNA快速建库试剂盒(Illumina平台)。本试剂盒是针对于Illumina高通量测序平台研发的一款快速建库试剂盒，采用体外转座技术，仅需10分钟即可一步实现1-100ng DNA的片段化并添加上接头，无需经过传统文库制备时的片段化、末端修复、接头连接等繁琐步骤，随后使用本试剂盒进行PCR扩增就能获得适用于Illumina测序平台的高通量测序文库。本试剂盒具有DNA样品需求量低、操作方法简便、文库构建时间短等优点，适合于基因组DNA、PCR扩增产物或质粒等样品的片段化、接头连接及扩增。

二代测序(Next generation sequencing, NGS)，又称为高通量测序(High-throughput sequencing)或深度测序(Deep sequencing)，是基于PCR和基因芯片发展而来的新一代DNA测序技术。二代测序的实验操作步骤包括：样品准备(Sample preparation)、成簇(Cluster generation)、测序(Sequencing)和数据分析(Data analysis)。在二代测序中单个DNA分子必须扩增成由相同DNA组成的基因簇，然后通过同步复制来增强荧光信号强度从而解读出DNA序列。但是随着读长的增加，基因簇复制的协同性降低，导致测序质量下降，因此二代测序的准确读长会受到一定的限制，目前两端测序的情况下读长通常不超过500bp或600bp [1]。

本试剂盒的工作原理及流程步骤如图1所示。基因组DNA等DNA样品在BeyoNGS™ Tn5 Transposome的作用下通过Tagmentation (including DNA fragmentation and tagging)一步反应实现DNA片段化(Fragmentation)和接头连接，连接产物通过后续的PCR反应进行缺口填补，并借助双端标识PCR引物(Dual-Indexed PCR Primers)扩增后，制备成适用于Illumina二代测序平台的DNA文库，再经过DNA分选磁珠等方法去除大片段DNA、引物和PCR反应液等，最终得到片段大小符合预期的DNA文库用于二代测序[2-4]。

图1. BeyoNGS™ DNA Library Quick-Prep Kit (For Illumina) (D7103)的建库流程图。PCR扩增引物须根据实验需要自行准备。PCR扩增产物的长度主要集中在300bp左右，通常在200-500bp范围内。

本试剂盒提供了更适合文库扩增的BeyoNGS™ PCR Master Mix (2X)，使用了高保真、扩增速度快的DNA Polymerase，提供了优化的反应缓冲液，只需加入上一步骤获得的DNA片段与接头的连接产物及适当引物，大大简化了文库扩增操作，减少了PCR操作过程中可能导致的污染，而且扩增过程中的错误发生概率极低，确保文库扩增的保真度、高效率、均一性和可重复性。

本试剂盒不提供扩增反应所需的Dual-Indexed PCR Primers。碧云天提供的BeyoNGS™ Dual-Indexed Primers of Tagmentation Set1/2/3/4 (For Illumina) (D9021/D9022/D9023/D9024)，每个系列(Set)含有48种双端8bp索引序列(barcode)的组合引物，当4个系列一起使用可构建384种不同Barcode组合文库，用户可根据实验需求适当选择使用。

产品用途：本试剂盒适用于将DNA样品制备成Illumina高通量测序平台专用文库。采用碧云天的BeyoNGS™ DNA Library Quick-Prep Kit (For Illumina)制备的DNA文库效果，请参考图2。

图2. 碧云天BeyoNGS™ DNA Library Quick-Prep Kit (For Illumina)制备的DNA文库效果图。在20μl反应体系中，加入100ng Lamda DNA及相应量的BeyoNGS™ Tn5 Transposome，55ºC孵育5min，反应完毕加入5μl Stop Buffer (5X)，混匀后55ºC孵育5min终止反应。产物经相应引物分别PCR扩增5、10和15个循环，得到的产物即为适用于Illumina二代测序平台的DNA文库(未进行片段大小分选)。加入适量 DNA上样缓冲液(6X) (D0071)，使用BeyoGel™琼脂糖预制胶(D0161)进行电泳检测。实际效果会因样品种类、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本试剂盒BeyoNGS™ Tn5 Transposome中的ME和接头(Adapters)的序列如下。

ME: 5'-p-CTGTCTCTTATACACATCT-3'-OH

Primer 1: 5'-OH-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3'-OH

Primer 2: 5'-OH-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG-3'-OH

注：上述接头序列与Nextera^® DNA Sample Preparation Kit (Illumina, FC-121-1030/1031)或Nextera XT DNA

Library Preparation Kit (Illumina, FC-131-1024/1096)一致。

按使用说明操作，如果每个反应使用1μl的BeyoNGS™ Tn5 Transposome (20μM)，本试剂盒小包装和中包装可分别进行20次和100次反应。

-20ºC保存，一年有效。

本试剂盒中的BeyoNGS™ Tn5 Transposome (20μM)储存溶液含50%甘油，在-20ºC保存不会冻结。须避免-80ºC保存，否则会冻结，反复冻融可能会影响Tn5转座酶的活性。

本试剂盒中的BeyoNGS™ Tn5 Transposome (20μM)较为粘稠，吸取时注意取样量准确，加样后请注意充分吹打混匀，避免产生气泡。

本试剂盒中的BeyoNGS™ Tn5 Transposome (20μM)的反应底物为DNA，不能用于RNA实验。

BeyoNGS™ PCR Master Mix (2X)在使用前，一定要完全融化，并上下颠倒轻轻混匀后才能使用，尽量避免产生气泡。

所需的Ultrapure Water，推荐选购碧云天的BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。