大肠杆菌菌株Nissle 1917是一种非致病的共生大肠杆菌分离物，1917年由德国微生物学家Alfred Nissle 从一名未感染痢疾的士兵肠道中分离出一株大肠杆菌，这个菌株可以作为药物治疗其他感染者，后来被命名为Nissle 1917，通常也缩写为EcN。EcN是一株未经过改造的野生型大肠杆菌菌株，不产生任何肠毒素或细胞毒素（肠毒素是由某些微生物产生的毒素，可引起胃肠道症状）。EcN 属血清O6:K5:H1型，其LPS侧链较短，且K5型夹膜具有血清敏感性，在体内易被血清清除，因此EcN不具致病性。EcN可以抑制肠道内病原菌的生长，防止病原菌在肠道内定植，同时具有抗炎作用。EcN在临床上主要用于胃肠功能障碍性疾病的治疗，例如克罗恩病、炎症性肠病及便秘等。本公司的E.coli Nissle 1917菌株来源于Mutaflor的EcN益生菌，是一种非致病性微生物，食用后可以促进消化系统健康；该EcN株系胞内含有两个野生型辅助质粒pMUT1(3173bp)、pMUT2(5514bp)，这两个质粒无已知功能，无明显的筛选标记，但在大肠杆菌中可稳定存在，可作为EcN菌株的鉴定标准质粒使用，也可作为EcN菌株的加工平台，对pMUT1、pMUT2进行加工改造可连入外源基因，可表达蛋白或引入外源小RNA分子等。EcN菌株核酸酶endA1为野生型，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液尽量去除核酸酶对质粒的污染，防止质粒降解；另外染色体中携带有功能的Dcm甲基化酶；不可用于蓝、白斑筛选。E.coli nissle 1917感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，Amp^R）检测转化效率>1×10⁷ cfu/μg DNA。

操作方法

1. E.coli nissle 1917感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒，并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15 h。