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碧云天的BeyoMag™ Anti-Ubiquitin Magnetic Beads，即Anti-Ubiquitin磁珠，也称Anti-Poly-ubiquitin磁珠、Anti-Polyubiquitin磁珠、Anti-Ubiquitin mAb-Magnetic Beads、Anti-Ubiquitin单抗磁珠、Anti-Multi Ubiquitin免疫磁珠、多泛素抗体磁珠或泛素化亲和磁珠，由高质量的Ubiquitin兔单克隆抗体与纳米级氨基磁珠偶联而成，可特异性地与人或者大小鼠等细胞裂解液、血清、腹水等样品中的泛素化蛋白(Ubiquitinated protein)结合，从而用于泛素化蛋白或其蛋白复合物的免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)、免疫共沉淀(Co-IP)、富集或纯化。本产品可以识别单泛素化蛋白(Mono-ubiquitin proteins)也可以识别多泛素化蛋白(Poly-ubiquitin proteins)。
泛素(Ubiquitin)是一种序列高度保守的蛋白，具有76个氨基酸残基，分子量为8.5kDa，几乎存在于真核生物的所有组织中。泛素在特定酶作用下，对底物蛋白的赖氨酸进行特异性修饰的过程称为泛素化(Ubiquitination)。多聚泛素化(Polyubiquitination)的主要功能是标记需要降解的蛋白质，然后被蛋白酶体识别和降解，这个降解途径被称为泛素-蛋白酶体途径(Ubiquitin-proteasome system, UPS) [1]，包括：蛋白底物、泛素、泛素激活酶(Ubiquitin-activating enzymes，简称E1)、泛素偶联酶(Ubiquitin-conjugating enzymes，简称E2)、泛素-蛋白连接酶(Ubiquitin ligases，简称E3)、蛋白酶体和泛素解离酶(Deubiquitinating enzymes，简称DUBs)。赖氨酸泛素化修饰在多个细胞过程的调控中起着核心作用。多聚泛素化还调节膜蛋白运输，改变蛋白-蛋白相互作用并调控多种信号转导通路的活性，该过程涉及一大类家族的酶并调控多种功能[2-4]。此外单泛素化(Monoubiquitination)和多单泛素化(Multimonoubiquitination)也有着重要的生物学功能[5]。
蛋白质泛素化修饰是真核生物普遍而又复杂的翻译后修饰，在细胞的信号转导、生长、发育、代谢等生命过程中发挥着重要作用。泛素化过程的失调则与神经退行性疾病、炎症反应、癌症等重大疾病的发生发展密切相关。分析和研究蛋白质泛素化的结构与功能，可为探索疾病调控内在规律和发现新的诊断策略提供重要信息。生命体系的高度复杂性，泛素化修饰位点、结构类型的多变和多样性，及时空动态变化等特点给蛋白质泛素化分析研究带来了巨大的挑战。亲和分离以其高选择性成为泛素化蛋白结构与功能研究的有力工具。免疫亲和分离法基于抗原-抗体相互作用，是最为经典的分离分析方法之一，已广泛应用于泛素化蛋白或肽段的富集分离[6]。
BeyoMag™ Anti-Ubiquitin Magnetic Beads (Anti-Ubiquitin磁珠)可特异性地结合泛素化蛋白，并可以借助磁力架等磁分离设备非常便捷地应用于泛素化蛋白或其蛋白复合物的免疫沉淀或纯化等实验。本产品进行免疫沉淀的流程请参考图1。
图1. 碧云天BeyoMag™ Anti-Ubiquitin Magnetic Beads (P2441)免疫沉淀流程图。
本产品特异性强、靶蛋白结合量高。与国内外大多数的同类产品相比，本产品抗体结合密度高，对泛素化蛋白的结合具有很强的特异性，并且本产品磁珠粒径小，不易产生非特异吸附。本产品每毫升磁珠悬浊液含约10mg磁珠，含有不少于0.2mg Ubiquitin抗体，通常可结合不少于0.2mg泛素化蛋白，具体的最大结合量和泛素化蛋白的分子量大小、多聚化程度等相关。每500微升样品，通常仅需使用50微升磁珠悬浊液，就可以高效地进行免疫沉淀实验。
本产品可结合多种形式的泛素化蛋白。本产品可特异性地结合单泛素化蛋白(Monoubiquitinated proteins)和多泛素化蛋白(Polyubiquitinated proteins)。
本产品结合目的蛋白速度快。本产品使用了纳米级磁珠(~200nm)，具有超大的比表面积，便于抗体和抗原的快速有效结合。通常30分钟内即可完成抗原吸附的过程，60分钟内完成目的蛋白免疫沉淀操作。缩短操作时间可以有效避免在长时间操作过程中目的蛋白的降解或变性，充分保证目的蛋白的活性。
本产品可选择多种洗脱方法。本产品根据目的蛋白的结构、生物学功能及后续应用的要求等，使用多种洗脱方法，包括SDS-PAGE上样缓冲液和酸性等洗脱液进行洗脱。
本产品的主要指标如下表：
| Characteristics | Description |
| Product content | 10mg/ml magnetic beads in specific protective buffer |
| Beads size | ~200nm |
| Magnetization | Superparamagnetic |
| Coupled antibody | Anti-Ubiquitin Rabbit monoclonal antibody |
| Isotype | IgG |
| M.W. of antibody | Approximately 150kDa |
| Antibody concentration | ≥ 0.2mg Ubiquitin antibody per ml beads |
| Binding capacity | ≥ 0.2mg Ubiquitinated protein per ml beads |
| Specificity | Monoubiquitinated proteins and polyubiquitinated proteins |
| Elution method |
SDS-PAGE loading buffer or Acid elution. Note: If elute with SDS-PAGE loading buffer, the light (~25kDa) and heavy (~50kDa) chain of Ubiquitin antibody will be denatured and release from the beads. |
| Application | IP, Co-IP, Protein purification |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| P2441-0.5ml | BeyoMag™ Anti-Ubiquitin Magnetic Beads | 0.5ml |
| P2441-2ml | BeyoMag™ Anti-Ubiquitin Magnetic Beads | 2ml |
| — | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存，两年有效。4ºC保存，至少一个月内有效。
注意事项：由于泛素化蛋白与Ubiquitin抗体的结合力非常强，酸性洗脱的效果可能比较差，建议优先使用SDS-PAGE上样缓冲液洗脱法。此时后续用于Western检测时，建议使用非兔来源的抗体进行检测，以避免洗脱下来的Ubiqutin兔单抗干扰Western检测。
本产品需维持pH为6-8，避免高速离心、干燥；请勿长时间将磁珠置于磁场中，否则可能会引起磁珠聚团。
本产品使用前要适当充分重悬，即颠倒若干次使磁珠混合均匀，混匀操作须轻柔，不宜剧烈涡旋震荡等，避免抗体变性等。
在免疫沉淀或纯化时，建议设置阳性和阴性对照组。
蛋白样品收集后宜尽快完成纯化工作，并应始终放置在4ºC或冰浴，以减缓蛋白降解或变性。为有效抑制蛋白降解，可以在蛋白样品中添加适量的蛋白酶抑制剂混合物，例如碧云天的蛋白酶抑制剂混合物(通用型, 100X) (P1005/P1006)、蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型, 质谱兼容, 50X) (P1048/P1049)、蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 100X) (P1010/P1011)、蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 50X) (P1050/P1051)等。
如果使用真空泵等仪器吸取上清液，须注意真空泵的吸液强度，以免吸力过大而吸取到聚集的磁珠。
酸性溶液洗脱时磁珠可能会发生聚集，属于正常现象，不影响磁珠的正常使用。0.1%的非离子型去垢剂(如Triton X-100、Tween-20或NP-40)可有效防止磁珠聚集，并且不会影响磁珠的抗体结合效率。
高浓度的DTT、巯基乙醇、盐酸胍等对本产品与标签蛋白的结合可能有一定影响，但Western及IP细胞裂解液(P0013)、RIPA裂解液(P0013B/C/D)或NP-40裂解液(P0013F)等都完全适用。碧云天生产的不同裂解液的主要特点和差异，以及如何选择裂解液可参考我们的相关网页：http://www.beyotime.com/support/lysis-buffer.htm。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。