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http://www.nature.com/app_notes/nmeth/2012/121007/pdf/an8624.pdf
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重新发现肌动蛋白的细胞骨架:美国UCSD莫里斯癌症中心Richard Klemke博士发现了细胞迁移的新技术。
肌动蛋白细胞骨架是由肌动蛋白聚合物和多种相关蛋白组成的高度动态网络。肌动蛋白细胞骨架的功能是介导全部真核细胞中的各种基本生物学功能,包括细胞内和细胞外运动和结构
支持(Chen,C.S.,et al.,2003;Frixione E.,2000)。为了执行这些功能,必须在时间和空间上严格调节肌动蛋白细胞骨架的组织。因此,与肌动蛋白细胞骨架相关的许多蛋白质可能是控制肌动蛋白组装的信号通路的靶标。肌动蛋白的细胞骨架组装在多个水平上受到调节,包括将肌动蛋白单体(G-肌动蛋白)组织成肌动蛋白聚合物以及将肌动蛋白聚合物超组织成丝状网络(F-肌动蛋白–是微丝的主要成分)(Bretscher,a.,et al.,1994)。肌动蛋白聚合物向丝状网络的这种超组织是由肌动蛋白侧结合或交联蛋白介导的(Dubreuil,R.R.,1991;Matsudaira,P.,1991;Matsudaira,P.,1994)。肌动蛋白的细胞骨架是一种动态结构,可响应刺激和细胞周期进程而迅速改变形状和组织。因此,其正常调节的破坏可能导致细胞转化和癌症。已显示转化的细胞比未转化的细胞含有更少的F-肌动蛋白,并且在整个细胞周期中表现出非典型的F-肌动蛋白水平协调(Rao,J.Y.,et al.,1990)。因此,肌动蛋白丝在细胞内的取向分布是细胞形状和运动性的重要决定因素。
局灶性粘连和粘附连接是膜相关复合物,可作为肌动蛋白丝的成核位点以及细胞外部,质膜和肌动蛋白细胞骨架之间的交联剂(Yamada,K.M.,Geiger,B.,1997)。粘着斑的功能是结构性的,将外部的ECM与内部的肌动蛋白细胞骨架联系起来。它们也是信号转导的位点,响应粘连而启动信号传导途径。粘着斑由附着在细胞外基质上的整联蛋白型受体组成,并与含有纽蛋白(通用粘着粘连标记),talin,α-肌动蛋白,桩蛋白,张力蛋白,斑联蛋白和粘着斑激酶(FAK)的蛋白复合物在细胞内相关(Burridge, K., et al., 1990; Turner, C.E., Burridge, K., 1991)。
传统上,由于细胞骨架在诸如Triton-X100等传统去污剂中的不溶性,研究与肌动蛋白细胞骨架相关并调节肌动蛋白细胞骨架的蛋白质一直很困难。多年来的工作表明,许多肌动蛋白调节蛋白/磷酸蛋白在激活后会从可溶性细胞质区室转移到不溶性肌动蛋白细胞骨架。这些重要蛋白质的不溶性使得难以研究其与肌动蛋白结合后的生化变化,例如磷酸化和亚硝基化。迫切需要一种细胞骨架纯化方法,该方法可以选择性富集与细胞骨架相关的蛋白质,以进行详细的蛋白生化分析。这种方法将提供直接研究正常和患病细胞骨架中这一重要蛋白质库的手段。,官网链接:https://www.sigmaaldrich.cn/product/mm/1710195
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