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CRISPR相关核酸内切酶Cas9(UniProt:J7RUA5;也称为SaCas9)由Cas9基因编码(基因ID:在金黄色葡萄球菌中。CRISPR(聚集的规则间隔的短回文重复序列)是一种适应性免疫系统,提供针对移动遗传元件(病毒、转座因子和接合质粒)的保护。CRISPR簇包含间隔子、与先前的移动元件互补的序列和靶标入侵的核酸。CRISPR簇被转录并加工成CRISPR RNA(crRNA)。在II型CRISPR系统中,pre-crRNA的正确加工需要反式编码的小RNA(tracrRNA)、内源核糖核酸酶3(rnc)和该蛋白。tracrRNA可作为核糖核酸酶3辅助pre-crRNA加工的指导。随后,Cas9/crRNA/tracrRNA核酸内切裂解与间隔子互补的线性或环状dsDNA靶标。在没有2个指导RNA(gRNA)的情况下,Cas9是无活性的。Cas9识别CRISPR重复序列中的原间隔子相邻基序(PAM),以帮助区分自我与非自我,因为细菌CRISPR基因座内的靶标没有PAM。催化活性也需要PAM识别。Cas9核酸内切切割与间隔子互补的线性或环状dsDNA靶标。与crRNA不互补的靶链首先进行内切,然后进行3′-5′外切。,官网链接:https://www.sigmaaldrich.cn/product/mm/mac142
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